[求救] pro 5-alpha 的 Competent cell 製作
發問時請注意，若是要問實驗相關的問題，請將實驗的步驟、所用的條件大致列出
以方便板友幫您追蹤問題
若是求救事項涉及實驗室智慧財產(例如細胞細菌植株、質體載體等）之分讓，
請務必註明貴實驗室願意設立 正式合作或 簽署材料分讓協議(MTA)，否則版工將逕行刪除
----請將上列注意事項以 ctrl + k 刪除後開始編輯文章----
目前我做Competent cell
菌種是pro 5-alpha
做法是Rubidium Chloride method：
前一天先將菌養在10 ml O/N
隔天1/100加入培養
當A600到達 0.5 冰浴15min左右
用0.4被體積的Tfb I 沖洗，放冰上15 min 左右
再用1/100的 Tfb II 洗 ，放冰上 15min 左右
最後分裝 50 ul，迅速放入液態氮
最後裝盒放 -80度保存
隔天測效率：
分別用濃度 100pg / ul
1 ng / ul
10 ng / ul
的DNA，加入 5ul
冰上靜置30 min，42度heat shock 1 分鐘
迅速放冰上等5分鐘
將細菌放入 1 ml 的LB，培養一小時
取 100 ul 圖盤
結果效率卻只有 5 * 10 ^5
效率頗低。。。
想請問有人做過該菌種嗎？
還是有認為哪一步錯了呢？
謝謝 Orz
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 163.25.93.195
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