[求救] 蛋白質萃取 去除DNA

看板Biotech作者 (OPPA)時間10年前 (2013/10/31 11:30), 編輯推噓1(1推 0噓 1→)
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最近在萃取Taq DNA polymerase 表現用的菌株是rosetta 萃取方式為破菌>75度C 水浴 30分鐘>離心>取上清液>加storage buffer save 使用的破菌buffer是 Buffer A: 50mM Tris-HCl, pH 7.9, 50 mM dextrose, 1mM EDTA, 4 mg/ml lysozyme Buffer B: 10 mM Tris-HCl, pH 7.9, 50mM KCl, 0.5% Tween-20, 0.5% NP-40 但是最終發現有DNA contamination，有試過用sonication方式 但PCR時還是有產物出現(在沒加template的情形) 現在想利用DNase於破菌完的步驟進去作用，EDTA會拿掉，改用PMSF 想請問在buffer A, B的環境下，DNase會作用的好嗎? 有查到DNase在高鹽度環境下活性會降低 是否有更好的辦法去除DNA呢? 感謝大家耐心閱讀與解答 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 42.66.47.117
推
11/01 12:05, , 1F
去除EDTA後 請加5mM MgCl2, DNase I才會有效果
11/01 12:05, 1F
→
11/01 12:07, , 2F
稍微shaking 15min
11/01 12:07, 2F
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