[求救]mice lung 的 total Akt 不表現?

看板Biotech作者garlic774 (蒜頭)時間11年前 (2013/07/03 22:52)推噓3(3推 0噓 8→)

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各位大大好~ 我想看某藥物對primary cultre的Akt(total 或 phospho form) 然後拿mice 整顆 lung 當作 positive control 結果: 1. primay culture(有無加藥的組別) 的total Akt or p-Akt都非常弱(protein量: 20 ug/ lane) 2. total lung 的 total Akt or p-Akt也都非常弱(protein量: 20, 50 ug/ lane) 抗體Akt:santa cruz(host:Goat; dilute:1:1000) 抗體p-Akt:santa cruz(host:Rabbit;dilute:1:1000) 兩支抗體"理論上"都應該壓得出來且背景乾淨(因為抗體是跟同學借來的他壓的很clean>"<) 但實際上不是..... 二抗: 1:5000 3. 壓片時間:5 min /1 image，連續4張 4. 所以問題A:total lung 適合拿來用作Akt/p-Akt的positive control嗎? 還是要用insulin/IGF刺激的cultured cell? 問題B:一般的total 器官 protein 不會有Akt 表現嗎? 問題C:p-Akt/total Akt可以染螢光嗎? 染螢光可以量化嗎? 問題D:還是其實我壓的是對的，lung tissue沒有 Akt表現我的primary culture 加藥或不加藥也都沒表現所以根本不是這條路徑? 感謝看完~ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.112.121.119 ※ 編輯: garlic774 來自: 140.112.121.119 (07/03 22:54) ※ 編輯: garlic774 來自: 140.112.121.119 (07/03 22:54) ※ 編輯: garlic774 來自: 140.112.121.119 (07/03 22:58)

推

mesenchymal

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mesenchymal

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※ 編輯: garlic774 來自: 140.112.121.119 (07/03 23:30)

推

keeny

07/08 15:26, , 3^F