[求救] 透析後出現白色混濁物

看板Biotech作者 (阿精)時間11年前 (2013/06/14 22:57), 編輯推噓2(2推 0噓 12→)
留言14則, 4人參與, 最新討論串1/1
各位板友大家好 我的問題如下,懇請高手解答 >< 感激不盡!! 我現在做的是分離白內障眼球的蛋白質... 大致上的流程是 1.研磨眼球(使用tris-buffer pH7.4) ->2.蛋白質定量後進FPLC管柱 分離蛋白 (沖堤液tris-buffer) ->3.收集想要的蛋白質peak ->4.透析 ->5.冷凍乾燥 -->6.測CD 目前我正在進行第四步~透析 可是透析袋內出現了白色的混濁物 看起來霧霧的東西! 很害怕是蛋白質壞掉了 察網路上是: 1.可能蛋白質濃度高 (這應該不可能~ 跑完管柱的溶液濃度應該很稀吧!) 2.因為鹽類變少了,所以蛋白質聚集起來 想請問的是: 1.蛋白質壞掉了嗎? 不知道還可不可以用>< 請問可以如何改善...需要離心後取上層液來作CD 這樣子? 下層不要理它 我總共透析了快三天 早知道不要放這麼久.... -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.116.162.76
推
06/15 00:34, , 1F
透析會有沉澱析出很正常 若有逐漸換buffer沉澱會比較少
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離心取上清液去做CD
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%謝謝您的回答
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後來想到我收集的是高分子量的集結體 本來水溶性就比較低
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06/15 00:38, , 5F
請問您說的逐漸換buffer是甚麼意思呢 不好意思看不太懂..
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透析的功能就把純化的buf.換掉成目標的，如果純化出來沒
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沉墊的話直接過desalting的管柱應該也是在換buf. 但可能
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還是要請教專業的,萬一desalting溶解度改變column就爆了
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06/15 01:22, , 9F
我是跑完FPLC才收集TUBE作透析的 之後要冷凍乾燥
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冷凍乾燥完 再作CD
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推
06/15 23:55, , 11F
假設你要從buffer A-->B就一開始從70%A+30%B逐漸換到100%B
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恭喜你 結晶了 (誤
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有這種軟趴趴的結晶嗎? >< 生化新手...訓練心臟中
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答案就是2吧
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