[求救] RAW 264.7誘導不出IL-1Beta.......

看板Biotech作者 (Daphnia)時間11年前 (2013/04/25 20:51), 編輯推噓8(8推 0噓 14→)
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發問時請注意，若是要問實驗相關的問題，請將實驗的步驟、所用的條件大致列出 以方便板友幫您追蹤問題 RAW264.7 細胞種在24孔盤5*10的五次方1 c.c.用LPS(200ng/ml)誘導24小時 用Ｒ＆Ｄ的ELISA kit DY401做 做了很多次都幾乎測不出IL-1 Beta 看了很多paper都發現條件都差不多別人做得出來我做不出來到底是怎麼回事？？？？？ 還是有特殊的小技巧才做得出來 也有聽說IL-1Beta 分泌量本來就非常少很容易測不出來？？？？ 誰可以救救我阿～ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.120.104.158
推
04/26 01:37, , 1F
細胞代數?Morphology還是圓形?有沒有Serum-free?
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Standard是否有跑出來?跟Control比較量?
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04/26 18:09, , 3F
代數為從凍保管出來後第五代,有些有長腳,誘導時還是含血清
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10%,standard指的是？任何處理組量都低於ELISA的偵測極限
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推
04/27 00:21, , 5F
Standard是kit內附的標準IL-1beta啊，這個有跑出來嗎?
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04/27 00:23, , 6F
LPS的效價可以保證嗎?濃度有沒有錯呢?是否有提高濃度作看
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看?
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推
04/27 03:48, , 8F
pro-inflammatory cytokine, 試試看早一點的時間點吧!
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推
04/27 15:23, , 9F
LPS處理6小時 IL-1B會最大量
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24 well 一格10的五次方 500ul/well 我做的是j774a.1
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raw 也做得出來，raw是否活化了? 狀態好嗎? raw不好養，
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推
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我印象中RAW沒有ASC,所以inflammasome不會活化耶
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用LPS最多pro-IL-1b會產生,但是要被cleaved成IL-1b需要
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inflammasome的活化,不過這是憑印象,請再確認一下
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標準曲線有做出來！
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所以IL–1B誘導時間6小時就可以了嗎？？怎麼感覺有點短
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所以IL–1B是短時間就會大量分泌嗎？我看一些paper都誘導2
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4小時也！？
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推
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RAW cell沒有ASC喔 所以即便有LPS刺激 IL-1 beta 還是無法
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05/01 23:11, , 20F
secrete出細胞外喔
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推
05/04 17:24, , 21F
不好意思，經過討論，大家都不建議RAW測IL-1B 抱歉 囧
05/04 17:24, 21F
推
05/11 01:55, , 22F
LPS 24小時做得出來哦 但是濃度不高哦 200pg/ml左右
05/11 01:55, 22F
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