[求救] SDS-PAGE 的 running buffer

看板Biotech作者 (匿名)時間11年前 (2013/03/28 00:32), 編輯推噓5(5推 0噓 2→)
留言7則, 6人參與, 最新討論串1/1
小弟是化工系的，最近想用SDS PAGE分離蛋白質然後定量 由於sample中的蛋白質總量很少(0.1 ug/ml)，所以使用SYPRO RUBY染色 放隔夜染色之後用10%酒精/7%醋酸洗30分鐘，就送去scaner讀了 不過做出來的結果，完全看不到蛋白質，marker條紋也很淡 據TechComm助理說應該不是染劑的問題，是膠有問題 但我確定我的seperating和stacking gel配方都對， loading buffer用100 mM DTT幫助變性 唯一發現有錯是running buffer沒有加0.1% SDS 想請問這樣會有影響嗎？ 另一個我想到的可能原因是，我染色前沒用fixation，這會是主要原因嗎？ 感謝各位的幫忙!! -- -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.112.61.143
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03/28 08:09, , 1F
SDS一定要加
03/28 08:09, 1F
推
03/28 13:10, , 2F
沒有SDS 就不叫SDS-PAGE了
03/28 13:10, 2F
推
03/28 16:26, , 3F
fix也要做
03/28 16:26, 3F
推
03/29 00:23, , 4F
加油 至少你有想出原因
03/29 00:23, 4F
推
03/29 00:57, , 5F
把東西確實操作一遍後再來做問題搜尋比較踏實
03/29 00:57, 5F
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03/29 00:58, , 6F
在"操作錯誤"上面打轉其實不好回答正確的問題
03/29 00:58, 6F
推
03/29 11:06, , 7F
SDS沒有加.....
03/29 11:06, 7F
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