[求救] a-SMA螢光染不出來

看板Biotech作者 (chun°)時間11年前 (2013/03/27 11:18), 編輯推噓7(7推 0噓 4→)
留言11則, 8人參與, 最新討論串1/1
最近在染 a-SMA(sigma) 的螢光 我是用24well plate種細胞，三天跟七天後收 1. 用4% paraformaldehyde 固定10min 2. PBS wash 5min*3 3. 抽乾PBS後加入 P/T (PBS+0.1% TritonX-100) 30min 4. PBS wash 5min*3 5. 用P/S (PBS+5% heat inactivated serum) blocking 6. 加入primary antibody (1:50) 4C O/N， 7. wash 10min*3 8. 加入2抗 (1:200) 2hr，避光 9. wash 5min*3 10. 染DAPI 1min抽掉 11. 200X拍照 --- 我看網路上的a-SMA以及抗體附上的datasheet，都有很明顯很漂亮的線狀 可是我染出來都沒有，不知道是不是用24 well plate的關係? 會跟玻片的差很多嗎? 附上我的螢光圖 http://tinyurl.com/dxr5cwu (3days) http://tinyurl.com/c7hpkx6 (7days) 不好意思麻煩各位了謝謝。 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 203.64.247.27
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03/27 17:43, , 1F
改別家抗體試試呀..
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背景有點髒ㄟ....
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用cover glass應該會好很多~
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推
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改用abcam的抗體... (這算工商服務嗎QwQ? XD)
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推
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抗體多試幾個條件吧，然後若非特殊需求，細胞滿度可以降
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03/29 17:05, , 6F
這串推文好有趣 XD
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推
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不要用abcam 好了...Dako的抗體比較好..XD(實話!)
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推
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樓上abcam....
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推
04/05 21:32, , 9F
你的titer太高了啦，所以才那麼髒，做個稀釋吧
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推
04/07 22:48, , 10F
serum來源是甚麼物種
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推
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推三樓cover glass
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