[求救] 以細菌設計Primer進行實驗之問題

看板Biotech作者 (陳小文)時間13年前 (2013/03/02 18:35), 編輯推噓2(2推 0噓 10→)
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大家好 請教一下大家，目前的實驗是針對所有細菌的16S設計Primer， 有參考paper & 自行設計的進行PCR實驗 後來發現進行PCR後，跑電泳，在單一菌株的位置是沒有問題的 但是在只有加ddH2O的那一管，在相同的位置也出現Band ddH2O已經有購買市面上無菌的純水以及所有藥品均已換新進行過實驗 不知道是否所有細菌的Primer不適合以ddH20當作Control？ 或 我有甚麼實驗有錯誤嗎？ 不懂為什麼ddH2O都會出現與設計片段大小相同的Band 謝謝 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 114.38.230.48
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Enzyme有些是從菌來的，有可能會污染
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推
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以前別的實驗室有發生過類似的事情，他們是pipette汙染。
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以及開蓋tube習慣不佳汙染。
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可以用filter的tip試試看
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換不同家PCR kit試試看
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通常我做這實驗前都會用紫外光照，因為滅菌釜無法消DNA
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就是汙染...... 整個流程都有問題
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以相同的水與試劑做病毒,黴菌,原蟲等其他實驗PCR皆無問題
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且都是同時進行的,結果都無問題,只有細菌出了問題,請問除了
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污染外,還有其他的可能性嗎?或者是酵素原來自細菌的關係呢
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推
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所以才說換家PCR kit試試看，之前我換另一家就好了
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有時候是廠商的酵素問題，(這問題我也搞了一兩個月)
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