[求救] Caspase 3 Assay kit測活性
想請教前輩們
因為利用H2O2做為殺死細胞的藥品
想要利用BD caspase 3 assay kit來測定caspase 3的activity
老闆是叫我測12,24hr
但我測時，發現有H2O2的組別跟control組並沒有太大差異...
先前學長姊及BD的protocol並沒有需要訂量protein
(BD protocol: lysis cell(2-10x10^6/ml 的lysis buffer)-->
incubate 在冰上30min
取50-100ul的lysis與substrate和HEPEs buffer mix
incubate in 37度1 hr)
但因為我24hr做不出來
2,6小時發現有差異...但並非顯著 (在6hr intensity差大概50)
所以...
是哪裡有需要改進的地方嗎???
我有問過BD的人說需不需要測並protein 濃度
BD說不需要...
所以...其實還是需要測的?
還是...我收細胞的時間太長了?
(H2O2treat大概在3hr有拍到PARP cleavage但不明顯，但在12hr有明顯的PARP cleavage)
這真的很困擾我啊!!!!!!!
謝謝
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 210.60.122.160
※ 編輯: kattyhouse 來自: 210.60.122.160 (02/02 01:45)
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