Re: [問題] SDS-PAGE dye轉黃&跑不動的問題

看板Biotech作者 (卡內省)時間13年前 (2012/12/11 20:27), 編輯推噓3(3推 0噓 16→)
留言19則, 7人參與, 最新討論串1/1
藉這篇許久以前的文章，我最近也遇到相同的問題， 不知道原po解決了嗎? 或是大雞還有甚麼其他的辦法? 我的野是dye約跑到距離底部還有1~2cm的地方就開始變黃， 然後band扭曲，再也跑不動， 染色或壓片之後發現 分子量低的都分不開， 所有buffer都重新配置且調過pH (只有running buffer沒調pH) 還是一樣， 過程中stacking : 60V seperating: 95V 全程在冰箱跑 我知道bromophenol blue是在pH=3的時候會變黃色， 可我實在想不透buffer的重配了還會有甚麼問題。 我的sample是植物的蛋白質 溶在Tris-HCl裡的， 用之前會加2X sample buffer with 2-ME 加熱95度C五分鐘， 不知道用Tris-HCl溶對整個的pH會有影響嗎? 令外我有看到有國外的網站說如果變黃色的話可以試著在sample 中一點點的 NaOH, 有人試過這方法嗎? 一點點不知道是加多少... -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 220.135.248.46 ※ 編輯: carnation 來自: 220.135.248.46 (12/11 20:28)
→
12/11 20:54, , 1F
gel含的Tris-HCl的配法?過酸或過鹼不斷中和造成的salt過多?
12/11 20:54, 1F
→
12/11 20:56, , 2F
以前隔壁實驗室跑膠一半之後變黃及需要cooler就是這個問題
12/11 20:56, 2F
推
12/11 21:24, , 3F
God 我也有這個問題 不過有時好有時糟 蠻困擾的
12/11 21:24, 3F
→
12/11 21:46, , 4F
我的seperating gel是2M TrisHCl pH8.8 稀釋，我再配這
12/11 21:46, 4F
→
12/11 21:47, , 5F
buffer的時候很難溶，好不容易靠加熱溶解，調pH的時候
12/11 21:47, 5F
→
12/11 21:47, , 6F
也調很久才到8.8
12/11 21:47, 6F
→
12/11 21:48, , 7F
另外stacking gel是1M TrisHCl pH6.8稀釋，溶解度還好
12/11 21:48, 7F
→
12/11 21:48, , 8F
但調pH也調很久...
12/11 21:48, 8F
→
12/11 22:22, , 9F
我猜的是配Tris 8.8或6.8stock的過程造成這些問題,而非稀釋
12/11 22:22, 9F
推
12/11 23:33, , 10F
2M和1M會不會太濃? 我們lab是1M和0.5M的 不過6.8本來就要
12/11 23:33, 10F
→
12/11 23:34, , 11F
調很一陣子
12/11 23:34, 11F
推
12/12 10:19, , 12F
我們都是1.5M....話說變黃色我跑久了還是跑掉
12/12 10:19, 12F
→
12/12 10:19, , 13F
另外我家跑168V.....
12/12 10:19, 13F
→
12/12 23:33, , 14F
可以試試看Tris base 調pH值比較方便
12/12 23:33, 14F
→
12/12 23:34, , 15F
不過我有點忘了配膠用的是哪一種tris 明天到實驗室查一下
12/12 23:34, 15F
→
12/13 08:14, , 16F
謝謝waddedaw ~
12/13 08:14, 16F
→
12/13 22:49, , 17F
請用 tris-base 配下層膠唷 沒意外的話配好的 pH 應該是對的
12/13 22:49, 17F
→
12/13 22:49, , 18F
你把緩衝用的溶液從 pH 6.8 滴定到 pH 8.8 它就沒有緩衝效果
12/13 22:49, 18F
→
12/13 22:50, , 19F
那跑到最後 pH 值一定會越來越酸
12/13 22:50, 19F
‣ 更多 carnation 的文章
文章代碼(AID): #1GnoQXqY (Biotech)