[求救]beta actin壓出來控制組跟誘導組差很多？

看板Biotech作者 (Daphnia)時間13年前 (2012/12/10 16:04), 編輯推噓5(5推 0噓 9→)
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用幽門螺旋桿菌誘導MKN45 24h 用細胞括勺收細胞(含菌)離心去除上清液用lysis buffer(promega biotech)破細胞 用BRAFORD定量蛋白 用8%的膠 轉漬的膜是用ＰＶＤＦ膜 用的抗體是聖誕老人的 https://www.dropbox.com/s/txah7f03rjap317/Bactin.pdf 最右邊的是沒有家菌的左邊的四個是幽門螺旋桿菌處理的 這到底是怎麼會是啦！！！拜託各位幫我想想是怎麼回事 我有想是不是我的菌讓我的細胞死掉很多或著是加了菌,菌的蛋白影響定量 這總實驗誘導的方式滿多ＰＡＰＥＲ都有用類似的方式但他們壓出來很像都沒有 類似的問題！！！ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.120.104.158 ※ 編輯: Daphnia 來自: 140.120.104.158 (12/10 16:06) ※ TW185930:轉錄至看板 Biology 12/10 16:58
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12/10 19:53, , 1F
換alpha tubulin,GAPDH,或是histone之類的試試看?
12/10 19:53, 1F
推
12/10 20:31, , 2F
私以為是HP菌的的蛋白質也被定量進去了
12/10 20:31, 2F
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12/10 20:32, , 3F
也因此human actin的比例也被壓低惹
12/10 20:32, 3F
推
12/10 20:35, , 4F
如果要證實的話可以去壓壓看HP菌的protein XD
12/10 20:35, 4F
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12/10 22:27, , 5F
控制組在誘導完破細胞時會加等量的hp一起收但壓出來一樣
12/10 22:27, 5F
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12/10 22:29, , 6F
想知道我用的lysis buffer會不會也收到菌的蛋白！？
12/10 22:29, 6F
推
12/10 23:06, , 7F
誘導的這段時間HP可能也會長,不知道有沒有考慮進去?
12/10 23:06, 7F
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12/11 01:39, , 8F
後來加進去的hp在同一個六孔盤培養所以會長應該差不多
12/11 01:39, 8F
推
12/11 09:57, , 9F
若是細胞有死很多的話可以試試看在離心完之後
12/11 09:57, 9F
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12/11 09:58, , 10F
用冰的PBS去把它打散在離心一次之後再破細胞...
12/11 09:58, 10F
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12/11 09:59, , 11F
因為medium裡面本身也有protein(from FBS)如果細胞真的
12/11 09:59, 11F
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12/11 10:00, , 12F
死很多的時候就會被這個影響~"~但我覺得應該不是就對了
12/11 10:00, 12F
推
12/11 10:05, , 13F
還是說定量的時候出問題?控制組濃度不小心爆表了= =?
12/11 10:05, 13F
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12/11 10:44, , 14F
感謝！以上方法我試試看
12/11 10:44, 14F
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