[求救] mutation的問題

看板Biotech作者 (sa74283)時間11年前 (2012/12/07 15:22), 編輯推噓1(1推 0噓 11→)
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最近用quikchange的kit在做mutation PCR之後有跑gel，可以看到明顯的band DpnI digest之後做transform 卻沒有colony長出來 QQ 請問可能是哪步驟出問題了嗎?? 請大家給我意見吧!! 謝謝~~ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.128.67.249
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12/07 16:19, , 1F
recovey time?
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12/07 16:20, , 2F
recovery, sorry.
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1hr or 1hr以上 都有
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12/07 22:36, , 4F
TM是建議DpnI切完再跑膠,以免你看的band是uncut
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12/07 22:37, , 5F
如果band是真的,colony也沒長,直接從transform問題找起
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12/08 09:45, , 6F
是指看band是不是linear form的嗎?
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推
12/24 18:42, , 7F
我也用過這組kit 提供我的方法給你參考~
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我前面步驟都照protocol 但是P完等確定冷卻後(通常都偷
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懶冰4度O/N)然後再加入DpnI反應 接著取10ul去transform
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我用他提供的competent cell很難長
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難長colony 這是我的方法啦@@"有點偏方XDD
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12/24 18:45, , 12F
用他的competent cell很難長 所以我用我們家自己做的
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