[求救] western blot transfer

看板Biotech作者 (尋找大肚腩)時間13年前 (2012/12/02 14:17), 編輯推噓2(2推 0噓 9→)
留言11則, 5人參與, 最新討論串1/1
請問板上大大是否有人跑過565左右分子量的蛋白嗎? transfer的條件是? 我之前用過60mA O/N 但是回去染膠發現大分子的幾乎都沒過去(已把250的marker跑到5%膠的底部了) 希望大家幫幫忙 謝謝 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 203.64.247.31
推
12/03 11:20, , 1F
wet transfer?!我一般7X kda的都100mA o/n了~你只跑60?!
12/03 11:20, 1F
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12/03 15:14, , 2F
你要transfer大分子蛋白的話 transfer buffer中要含0.1%SDS
12/03 15:14, 2F
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12/03 15:15, , 3F
然後如果是用pvdf membrane就不要加methanol(活化membrane
12/03 15:15, 3F
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12/03 15:16, , 4F
還是要用) 不過buffer就不加methanol
12/03 15:16, 4F
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12/03 15:18, , 5F
然後我都是用400mA 60min 但tank要埋在冰裡降溫
12/03 15:18, 5F
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12/03 19:45, , 6F
若是一般transfer條件,400mA 60min對565kda的時間絕對太少
12/03 19:45, 6F
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12/14 18:24, , 7F
我們家transfer大分子會換buffer~
12/14 18:24, 7F
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12/14 18:25, , 8F
我們是溼式..跑100v 3~4小時 4度C
12/14 18:25, 8F
推
12/24 18:56, , 9F
可以在此偷偷求transfer buffer(含methanol)配方嗎?
12/24 18:56, 9F
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12/24 18:56, , 10F
我們家自從某一次搞丟以前的transfer buff配方用隔壁
12/24 18:56, 10F
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12/24 18:57, , 11F
實驗室的之後 都有tran不乾淨的狀況 從35kDa就會殘留
12/24 18:57, 11F
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