[求救] ICC double stain?

看板Biotech作者 (eric)時間13年前 (2012/11/24 19:17), 編輯推噓0(0推 0噓 15→)
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各位板友好 我最近在做ICC的實驗 必須要double stain兩種抗體 第一種的抗體host是rabbit 第二種是goat 因此我使用的二抗也有兩種 分別是donkey anti-goat(Cy3) 以及donkey-anti-rabbti(FITC) 我問學長時 他告訴我一抗跟二抗都可以以1:1混合一起加下去 一抗4度C overnight 而二抗室溫一小時 可是我用顯微鏡看的時候 兩個都沒有出現螢光!!! 所以想請問各位 是否一抗跟二抗不可以同時加下去呢?? 謝謝各位 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.112.121.98
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11/24 21:48, , 1F
[猜測] 你應該沒有單染抓好條件
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11/24 21:59, , 2F
嗯我還沒單染 明天會來試試看 只是想先問問大家:)
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11/25 03:03, , 3F
邏輯上 一二抗不能一起加 抗體先混在一起會產生抗體凝集效
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11/25 03:04, , 4F
應 一抗會被二抗凝集 不能好好作用其antigen
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除了特別廠商賣的二抗 才可以先和一抗加一起
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11/25 09:21, , 6F
樓上 不好意思 我指的是 先加完double stain的兩個一抗
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11/25 09:22, , 7F
作用overnight之後 再加入兩個二抗 並沒有一二抗一起加喔
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11/25 11:16, , 8F
我的double stain一直都是混加rabbit跟mouse 沒有問題
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11/25 11:17, , 9F
我覺得問題可能出在一抗跟抗原的那部份太低
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11/25 11:29, , 10F
不好意思 是指抗體濃度或是抗原表現太低嗎?
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11/25 15:37, , 11F
問題不是濃度太低或怎樣,而是做ICC本來就要先測試單染一抗
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11/25 15:40, , 12F
或二抗先測試抗體專一性與調整適合螢光強度,才會合併一二抗
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11/25 15:43, , 13F
每個抗原只要經過各別一,二抗測試,就能做你設想的co-stain
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11/25 15:49, , 14F
做ICC沒測試抗體竟得到不能一起染的推測,很缺乏實驗邏輯
11/25 15:49, 14F
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11/25 22:09, , 15F
樓上我了解了 謝謝
11/25 22:09, 15F
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