[求救] RAW264細胞發炎反應相關實驗

看板Biotech作者 ( 扶桑花小班班長)時間11年前 (2012/11/08 20:52), 編輯推噓3(3推 0噓 10→)
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我們研究室常需要用RAW細胞做發炎反應的相關實驗~ 基本上都是用LPS(5ug/ml)或3T3L1脂肪細胞的conditioned medium來誘發發炎反應, 但最近兩年RAW細胞的狀況一直不太穩定~ control組(PBS,serum free media)常已經處於發炎狀態， NO或TNF-a的分泌量都幾乎要跟LPS組的一樣多~ 買過新的RAW細胞,一開始情況有改善... 但passage2~3次之後,control組又開始出現發炎反應... 而且增殖的非常快,大概1~2天就要passage~ 這兩年發炎相關的實驗都無法正常進行... medium是用買的所以不太可能是配置上的問題 我有想過會不會是FBS的問題... 因為中間有換過廠商 但有時候實驗又可以正常進行... 請問有人有類似的經驗嗎??? RAW細胞的培養有什麼和其他細胞不一樣特別需要注意的地方嗎??? -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 210.146.150.104
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11/08 22:22, , 1F
以前養macrophage cell line都要買low-endotoxin FBS,
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Hyclone跟Gibco都有 可以問問其他實驗室或是sales適合的
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不過不能確定是不是跟你的問題有關
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11/12 22:36, , 4F
個人覺得FBS差很多耶 還有你用的PBS也有差
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推
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還有就是你有爆盤 FBS真的要挑LOW-ENDOTOXIN的
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如果你是用沖OR刮的手法讓碎片變多個人覺得也會有差
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FBS可以的話看用的量把同個批號買下來吧
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另外控制兩天OR三天passage吧 一天我也覺得很容易發炎
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推
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細胞不能太滿，一滿就容易受到刺激，推樓上，起碼要2天才
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能pa一次，macrophage很容易受到刺激活化，pa的過程也很
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很重要!
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推
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macrophage cell line在做發炎反應時,pa細胞時,建議用
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11/14 19:34, , 13F
建議用刮的,用Trpsin-EDTA打的話,易誘導發炎反應!!
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