[求救] co-transfection

看板Biotech作者 (人生就像個不可逆反應)時間13年前 (2012/10/31 21:11), 編輯推噓3(303)
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請問有做過co-transfection的各位, 近期我使用MCF7作transfection,發現只有其一會transfect成功, 亦即plasmid A和plasmid B中,我用western確認,只認到plasmid A 作出來的protein,卻沒有plasmid B。 這二個plasmid的vector是相同的(pcDNA3.1),protein大小差30 kDa左右。 目前有二個想法: 1、先transfect其中一個plasmid,過一段時間後(~8 hr)換medium,再transfect 另一個plasmid,再等48 hr。 2、作不同ratio的搭配,原本A:B=1:1,改成1:2, 1:3的組合,抓condition。 或是各位有什麼可能的解決方案呢??謝謝! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.114.237.129

10/31 22:04, , 1F
把其中ㄧ個的backbone換別的呢?
10/31 22:04, 1F

11/01 00:24, , 2F
各自transfect會成功嗎?
11/01 00:24, 2F

11/01 08:39, , 3F
我有單獨transfect plasmid B,可以成功。
11/01 08:39, 3F

11/01 10:27, , 4F
換backbone吧
11/01 10:27, 4F

11/04 22:01, , 5F
有考慮過用bicistronic vector嗎?
11/04 22:01, 5F

11/04 23:03, , 6F
我現在先試我的二個方案,再不行再試各位的建議T^T
11/04 23:03, 6F
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