請問抽E. coli plasmid

看板Biotech作者 (小名)時間13年前 (2012/09/30 10:48), 編輯推噓5(5推 0噓 7→)
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我用含抗生素LB 37度 震盪培養E. coli overnight 我個人經驗是培養12~16小時 盡量不要超過16小時 因為超過stationary phase後E. coli會快速死亡 所以在12~16小時之間 也就是log phase階段可以放4~8度C冰箱 在冰箱內放5個小時內再抽影響不大 可是我學姊說寧可37度養超過16小時也絕對不可以放冰箱 放冰箱後細菌會快速lysis導致抽不出來 請問大家的經驗overnight培養後是否可以放冰箱靜置? 附上我的protocol http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/0471142727.mb0106s15/pdf 我是參考current protocol操作 謝謝 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.112.24.5
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09/30 11:02, , 1F
我以往是前一天養 然後早上到實驗室transfer 下午抽
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09/30 11:03, , 2F
這樣就不存在養過久或者放冰箱的問題
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推
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看plasmid 有的要盡量fresh 有的4度或離下來冷凍都沒差
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09/30 16:18, , 4F
我的經驗是離下來凍-20，隔天抽沒問題，但還是建議現抽
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推
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建議pellet冰-20
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09/30 18:25, , 6F
我個人經驗放4度C 5小時內影響不大 請問大家的經驗影響大
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09/30 18:25, , 7F
嗎?
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推
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推pellet冰-20~
10/01 01:06, 8F
推
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推pellet冰-20~ 但要記得抽,看過有人冰一堆忘記抽...
10/01 03:09, 9F
推
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放室溫 早上放到下午還是可以抽
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10/01 20:35, , 11F
在Broth的情況下4度菌會死掉 放室溫不震盪我覺得較好
10/01 20:35, 11F
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10/04 11:19, , 12F
離下來冰-20之後再抽 和放桌上(室溫)8HR都抽過 沒什麼差
10/04 11:19, 12F
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