[求救] ELISA standard吸光值很低QQ

看板Biotech作者 (修)時間13年前 (2012/09/23 20:08), 編輯推噓2(2推 0噓 1→)
留言3則, 3人參與, 最新討論串1/1
我最近在測mouse血清的IL-1Ra 但是Standard吸光值越測越低 不知道為何QQ 廠商只有賣coating好一抗的 所以步驟直接從加sample開始 步驟: 加standard, sample 2.5nr→PBST洗4次 加二抗 1hr→PBST洗4次 加HRP 45min→PBST洗4次 加TMB 30min→加 stop solution 測OD450 然後我第一次pretest時std最高濃度(2000pg/ml)有1.3左右 第二次剩下0.6 第三次剩0.3(這次是用新一管的STD) 接著懷疑可能是我在溶解STD時沒先離心把管壁上殘餘的離下所以濃度不對 (protocol有說配STD前要先briefly spin) 然後買了新kit 9/20學姐先幫我測試STD 最高濃度(2000pg/ml)有3.0 雖然畫出來曲線後面已經平掉了 但表示STD很健康 9/23我做的STD卻只有0.5 QQQQQQQQQQQQQQQQQ 但是sample的部分都有1.多 稀釋STD時我都有vortex+pipet 我實在是不知道哪裡出了問題QQQQQQQQQQQ 我真的覺得我被鬼打到了 之前練習IL-33, IgM, TNFa standard都有到1.多 稀釋方法也都差不多.... 可以煩請各位前輩給我點建議嗎QQ? kit很貴我卻一直失敗.........QQ 謝謝大家!!!!!!!(跪 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 175.180.116.108 ※ 編輯: greenpeace29 來自: 175.180.116.108 (09/23 20:09)
→
09/24 09:14, , 1F
再請你學姐做一次, 就知道是你的問題還是kit的問題了 ^^
09/24 09:14, 1F
推
09/24 15:11, , 2F
請學姊看你做一次，看是不是有加錯還是有氣泡
09/24 15:11, 2F
推
09/24 23:04, , 3F
sodium zide好像會影響HRP. 看一下廠商的troubleshooting
09/24 23:04, 3F
‣ 更多 greenpeace29 的文章
文章代碼(AID): #1GNlkcrH (Biotech)