[求救] 關於RNA照膠

看板Biotech作者 (oleic)時間13年前 (2012/09/20 10:30), 編輯推噓1(1推 0噓 15→)
留言16則, 5人參與, 最新討論串1/1
想請問一下 當我萃取出total RNA之後 為什麼跑膠(還是用跑RNA專用的膠)的結果卻看不 到? 可是將其SAMPLE轉成cDNA之後 跑膠 卻可以看到有smear的現象 我目前的實驗流程: 取血離心→取中間層 (白血球 血小板)→用 RNeasy mini kit 萃取RNA (5 CC) (每管50ul) 利用Formaldehyde-Free RNA Gel Kit 來跑RNA電泳 (SAMPLE量為5uL) 跑膠的時間為15分鐘 (連MARKER都跑不出來 Marker是使用1Kb DNA ladder (同樣使用染RNA的 loading buffer) 可是使用跑DNA電泳的膠 以及SYBR Green I來染 卻可以照出有兩條明顯的band (雖然很 淡) 照膠的機器為Vilber Lourmat出廠的 http://www.vilber.com/products/Bioprint1.html (應該是這台) 麻煩大家 幫我想想看有什麼原因了!! 謝謝 因為也做了不下十次的測試 沒有看到過任何一次 總不可能手殘了十次吧(冏) -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 203.71.2.84
→
09/20 10:41, , 1F
抽出來的RNA 經過nanodrop的偵測 260/280皆在1.70~2.1內
09/20 10:41, 1F
→
09/20 10:52, , 2F
看起來像是染RNA的dye有問題
09/20 10:52, 2F
→
09/20 12:01, , 3F
(SAMPLE量為5uL)，重點是裡面有多少RNA呢？
09/20 12:01, 3F
→
09/20 12:22, , 4F
5~30ng/ul 不等(nanodrop所測得的數據)
09/20 12:22, 4F
→
09/20 12:24, , 5F
染RNA的dye 已經包含在loading buffer裡了
09/20 12:24, 5F
→
09/20 12:27, , 6F
http://ppt.cc/dDB4 此為RNA GEL的PROTOCOL
09/20 12:27, 6F
→
09/20 16:07, , 7F
應該是dye的問題+1 不過重點是你要幹嘛吧
09/20 16:07, 7F
→
09/20 16:07, , 8F
如果只是要跑check 一般的膠多放點EtBr就看得到了
09/20 16:07, 8F
→
09/20 19:51, , 9F
因為實驗室是第一次做RNA項目 老闆想試試看 以實驗室的情況
09/20 19:51, 9F
→
09/20 19:52, , 10F
是否可以做RNA相關的題目 因此想利用RNA的膠來確認看看 所
09/20 19:52, 10F
→
09/20 19:52, , 11F
萃取的RNA結果如何! (雖然OD 260/280幾乎都有在1.8~2.1間)
09/20 19:52, 11F
→
09/20 19:54, , 12F
EtBr的話 實驗室好像也沒有在用 而且照GEL的PROTOCOL 應該
09/20 19:54, 12F
→
09/20 19:54, , 13F
是使用他所提供的loading buffer就能染出來的!
09/20 19:54, 13F
→
09/20 19:55, , 14F
我會再問問看廠商dye的相關問題 感謝你們的幫忙!!
09/20 19:55, 14F
推
09/22 22:22, , 15F
不清楚最後再泡個ETBR 10分鐘就好了
09/22 22:22, 15F
→
09/22 22:23, , 16F
還有原PO的dye有加甘油嗎? 沒有甘油RNA會飄掉喔
09/22 22:23, 16F
‣ 更多 otneiv 的文章
文章代碼(AID): #1GMd_Bn9 (Biotech)