[方法] ligation

看板Biotech作者 (向日葵大燦笑)時間11年前 (2012/09/02 23:11), 編輯推噓0(0推 0噓 11→)
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請問做ligation時一直挑到空的vector要怎麼調整condition? 我的條件是（1）vector+insert=100 ng(2)(vector/mw):(insert/mw)=1:3,1:5,1:7我都試過了 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 49.215.249.144
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09/02 23:15, , 1F
加做alkaline phosphatase (CIP) 可能有幫助
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09/02 23:48, , 2F
可以試試ligation的時候加polyethylene glycol (PEG)
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09/03 09:16, , 3F
我用 alkaline phosphatase 做出來的clone都怪怪的說...
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09/03 09:17, , 4F
vector+insert =1:3 (total 200ng)4度C ligation O/N 試試
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可能就最後挑多一點吧.. 之前經驗 一次挑了25個 一次7個就
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有了... 頗運氣的 ~ 可以找新手 會有新手運XD
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我有加CIP,但看起來都不work.
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都放室溫下，overweekend
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哈哈哈！挑好久（（淚...
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ligate過周末的話還是放4度比較好,有跑膠確定vector
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09/03 16:41, , 11F
有沒有切乾淨嗎? plate上的colony是否爆炸多(plasmid)
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