[求救] 關於SDS-PAGE 大於約72kD的蛋白跑不開...

看板Biotech作者 (魚頭)時間13年前 (2012/08/18 00:26), 編輯推噓6(6推 0噓 12→)
留言18則, 12人參與, 最新討論串1/1
大家晚安 小弟最近開始進行蛋白質相關的實驗 不過最近不是很順..... 就是在跑SDS-PAGE時分子量在72kD以上的蛋白跑不開 都聚集成一條線 (marker也是) 但是在72kD以下的部分都很正常 後來我把buffer全部重配 pH重調 (上膠6.8 下膠8.8) 不過還是有一樣的狀況出現 想請問一下還有哪邊需要注意的呢? 謝謝大家 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.116.48.100
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幾%的gel?
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12%
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膠圖看起來像是72kD以上的蛋白全部被壓成一條線......
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08/18 01:33, , 4F
然後這條線大概壓在下膠靠近中間的位置......
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推
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降gel的%
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降%數 .. 跑久一點@@? sample煮久一點 @w@" 想不到了
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72KD以上要很低濃度的膠吧
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buffer有加SDS嗎?
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跑大片的膠
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08/18 08:41, , 10F
要看大範圍的話就用gradient的gel囉
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08/18 11:42, , 11F
謝謝大家~ 目前降%數跑跑看!!
08/18 11:42, 11F
剛剛換成10%的膠再跑一次 結果merker的部分 72kD和95kD黏在一起分不開..... 其他部分正常 sample的部分也是72kD以上黏在一起..... 然後buffer有加0.1% SDS 雖然我的蛋白才50幾kD 不過膠跑完長這樣實在是不好看..... 不知道還需要注意哪些地方..... 謝謝大家!!! ps. 膠在跑的時候72kD那邊有看到一條透明的線 通電的時候會跟著動 不知道這條線是哪來的 ="= ※ 編輯: storm780121 來自: 140.116.48.100 (08/18 12:30)
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08/18 12:53, , 12F
你有看書照建議配膠嗎?
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08/18 12:53, , 13F
收的時候留下帶有marker的膠圖,有圖比較知道是怎樣
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我之前也有這樣的問題 一模一樣!!!
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08/18 16:06, , 15F
結果發現是running buffer的問題!!! SDS那邊濃度有配錯
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08/18 16:07, , 16F
你可以再重配看看! 找一些網路上面的配方是否跟你一樣
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08/18 23:34, , 17F
感覺是SDS的問題
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08/19 17:25, , 18F
謝謝大家~ 問題在所有buffer重配後已經解決了~
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