[求救] RNA轉RT時忘記加RT enzyme

看板Biotech作者 (Jim)時間13年前 (2012/08/04 19:51), 編輯推噓6(6推 0噓 5→)
留言11則, 9人參與, 最新討論串1/1
利用的是fermentas的kit RNA要轉cDNA時加了dNTP、oligo dT、5Xreaction Buffer 但這次我忘記加了RT enzyme就直接跑了 等跑完RT後 跑PCR發現都沒有band 回想起來才發現忘記加RT enzyme RT的作用時間是42度C 60分鐘，70度C 5分鐘 我想請問的是可以把之前跑出來的RT product加入enzymeme後再跑一次嗎 因為我的RNA不太夠再跑一次RT... -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 111.250.35.198
推
08/04 22:28, , 1F
...RNA還活著嗎
08/04 22:28, 1F
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08/04 22:32, , 2F
應該degrade完了吧...
08/04 22:32, 2F
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08/05 02:29, , 3F
不加白不加 sample比enzyme還值錢阿(誤)
08/05 02:29, 3F
推
08/05 22:06, , 4F
重抽RNA
08/05 22:06, 4F
推
08/06 10:37, , 5F
所以RNA剩多少?你把體積放大再試ㄧ次reaction,不過我猜RNA
08/06 10:37, 5F
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08/06 10:37, , 6F
已經死光了
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08/06 12:44, , 7F
除非你正常RT完20ul體積全部都拿去跑PCR,不然剩下的RNA怎麼
08/06 12:44, 7F
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08/06 12:45, , 8F
會不夠？可以看一下RT kit提到的RNA最低用量,應該夠用才對
08/06 12:45, 8F
推
08/06 16:04, , 9F
至少....有個negative control....
08/06 16:04, 9F
推
08/06 22:39, , 10F
品質已經不好了 重做吧 免得後續浪費更多時間
08/06 22:39, 10F
推
08/07 00:07, , 11F
重作。不要浪費時間
08/07 00:07, 11F
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