[求救] 關於western到blocking之間的步驟

看板Biotech作者 (席得)時間12年前 (2012/07/21 16:29), 編輯推噓2(2推 0噓 6→)
留言8則, 4人參與, 最新討論串1/1
今天作western 剛剛進行完semi-dry的transfer後 就要將membrane放到 1%的牛奶blocking 配完牛奶後沒有馬上將牛奶放入要blocking的小盒子中 想說先放入membrane 再放入1%牛奶 只是剛rtransfer完後將膠從拿開 membrane眼看就要乾掉的fu 所以我把濾紙蓋到membrane上(是membrane的正面)再加一點TBST 避免乾掉 然後把盒子加入blocking的buffer再把濾紙拿開 把membrane夾進去盒子blocking 我覺得我有點擔心過頭 不過還是想問各位大大 把濾紙蓋到membrane正面上(濾紙本身應該還有transfer buffer在上面) 再加上TBST 這樣動作會不會transfer到membrane上的蛋白質有影響? 謝謝各位 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.114.97.153
推
07/21 16:30, , 1F
想太多了 不會
07/21 16:30, 1F
→
07/21 16:30, , 2F
其實連乾掉都沒關係 泡一下methanol就可以了
07/21 16:30, 2F
→
07/21 22:11, , 3F
贊同樓上
07/21 22:11, 3F
推
07/22 12:32, , 4F
有些protocol還建議Transfer完要給它乾一下，再block
07/22 12:32, 4F
→
07/23 21:55, , 5F
同意樓上的說法，有些membrane須要先晾乾，才可做block
07/23 21:55, 5F
→
07/23 21:56, , 6F
所以不需要想太多。至於先在膜上覆蓋沾濕的濾紙
07/23 21:56, 6F
→
07/23 21:57, , 7F
只要濾紙是乾淨的，應該不會有影響，而且抗體照理說
07/23 21:57, 7F
→
07/23 21:58, , 8F
不會辨識到一些非目標蛋白，因此你無須擔心
07/23 21:58, 8F
‣ 更多 jasmineapple 的文章
文章代碼(AID): #1G2cXpf8 (Biotech)