[求救] western 壓片

看板Biotech作者 (Ray)時間13年前 (2012/07/07 16:36), 編輯推噓8(803)
留言11則, 8人參與, 最新討論串1/1
小弟我壓的是EZH2 a-tublin的band都是正常的 但是EZH2都有問題 中間的band都會消失 (做了三四次都是這樣) 照理來說如果中間band消失 後面最高濃度也不會出現 大概像這樣 0mM~~~~~~~~~~~~5mM ▄ 沒 沒 沒 ▃ ▂ 但是tublin ▂ ▂ ▂ ▂ ▂ ▂ 會是ECL沾的時候有問題? 用過GE的最弱和第二弱的 做了好幾次都是中間band有問題阿~~ http://ppt.cc/B9Lw -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.128.67.246 ※ 編輯: raylie9093 來自: 140.128.67.246 (07/07 16:36)

07/07 23:59, , 1F
看起來似乎是沒有表現,sample有load對嗎?或是sample
07/07 23:59, 1F

07/08 00:00, , 2F
處理有問題
07/08 00:00, 2F
SAMPLE應該是沒有LOAD錯 除非我手有問題每次都這樣zzzz

07/08 00:37, , 3F
我也覺得沒表現...可是tubulin..真奇怪
07/08 00:37, 3F
就是tublin量又是很equal 就不知道為什麼會這樣子

07/08 00:40, , 4F
stripping之後用同樣size的其他抗體壓壓看就知道了
07/08 00:40, 4F
是卡同樣的kDa的ab上去嗎??

07/08 23:46, , 5F
搞不好有biphasic effect
07/08 23:46, 5F
有去爬文看看 可是有點不太懂 但是如果這樣子...好像也很難解釋

07/09 12:07, , 6F
如果三四次都這樣 就真的是這樣了 不可能每次都錯那幾組
07/09 12:07, 6F
對阿 可是要怎麼跟老闆解釋ORZ 這是個很大的難題

07/10 00:21, , 7F
membrane可染染看coomassie blue 看中間有沒有protein
07/10 00:21, 7F
好!這個我會試試看

07/10 09:31, , 8F
這是total protein嘛?
07/10 09:31, 8F
我quantification之後然後去跑的 ※ 編輯: raylie9093 來自: 140.128.67.246 (07/10 10:48)

07/10 10:53, , 9F
如果ponceau S或coomassie blue染出來沒問題,步驟也OK
07/10 10:53, 9F

07/10 10:54, , 10F
又是replicable,那就當做是現象吧。看看H3K27me3吧
07/10 10:54, 10F

07/11 22:28, , 11F
還是換一下loading的順序試試看呢?
07/11 22:28, 11F
文章代碼(AID): #1Fz_JpDr (Biotech)