[閒聊] 有關PCR的taq enzyme

看板Biotech作者 (是喜歡msn不是喜歡男生)時間12年前 (2012/07/06 17:21), 編輯推噓6(6推 0噓 8→)
留言14則, 10人參與, 最新討論串1/1
小弟算是作PCR實驗的新手 作實驗作了一段時間後 發現作PCR的 taq enzyme是一個很奇妙的東西 我們家作實驗時會把PCR buffer，dNTP mix，primer和taq先加在一起 之後在"放在冰上"操作 可是據小弟瞭解，taq不是一種很穩定的東西嘛? 它連九十幾度高溫都可以忍受 那為啥不能在室溫下操作? 而且保存時都要放在-20度 這個問題我想了很久，不曉得有沒有高手可以幫我解答 感謝~ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 210.60.122.160
推
07/06 18:07, , 1F
室溫操作可以啊，只是因為是酵素，當然要保護它囉
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基本上Taq運送的時候是室溫在運送的..
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07/06 18:19, , 3F
恩 以前常聽老師說Taq太少的話PCR後期死光就沒了
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07/06 18:27, , 4F
能忍受高溫不等於穩定
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推
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能忍受不代表Taq在那個溫度很開心很穩定 還是會壞的
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而且一管taq可能會用很多次 所以才要放在冰上
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推
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90多度可以忍受 可是還是有其壽命 所以你看一般taq都會說
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45cycle後或72度長時間後 其活性就衰減
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推
07/06 23:15, , 9F
Taq: 啊啊啊~~ 要壞掉了~~
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推
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我有聽說你這樣搞會有non-specific binding
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07/09 07:51, , 11F
其中一個重要的原因是低溫下可避免不想要的反應發生，譬
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如樓上提及的non-specific binding。
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感謝各樓層大大精闢的解析~我再消化一下~^^
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推
07/10 08:35, , 14F
沒錯 放冰上是避免非專一性反應 有hotstart可以放室溫
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