[求救] western blot band 反白

看板Biotech作者時間12年前 (2012/07/06 15:29), 編輯推噓10(10推 0噓 10→)
留言20則, 11人參與, 最新討論串1/1
想請問一個問題，壓caspase-3，proform的有壓出來(黑band)， 但是actived caspase-3 的band是白色的， 正負片沒有調， 壓caspase-9(黑band)，沒有這問題， substrate的反應時間也很少，說是過量反應的話，也很奇怪！ 想知道是哪裡出錯了! 麻煩各位了！感激不盡! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 120.101.28.119
推
07/06 23:33, , 1F
誰告訴你說短時間不會爆炸的...
07/06 23:33, 1F
推
07/07 00:58, , 2F
蛋白量很多的話短時間還是會過量反應阿
07/07 00:58, 2F
推
07/07 21:07, , 3F
加太多 不到一秒就爆了
07/07 21:07, 3F
推
07/08 01:05, , 4F
我碰過很多ab是ECL一加下去，就亮了，肉眼可見
07/08 01:05, 4F
推
07/08 01:24, , 5F
一抗濃度再降低,有回收使用的話再加buffer稀釋吧~
07/08 01:24, 5F
推
07/09 11:04, , 6F
同意爆炸+1~
07/09 11:04, 6F
推
07/10 20:08, , 7F
我是生技公司的廠商，band會反白大多會是跟你的ECL反應太
07/10 20:08, 7F
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07/10 20:09, , 8F
快速，訊號一下衝上去你的蛋白就燒掉了，一秒也會爆哦~
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07/10 21:41, , 9F
爆的話也很奇怪，因為是切出來的，如果會爆，那PROFORM的
07/10 21:41, 9F
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07/10 21:43, , 10F
也會爆了，因為量比較多。目前是將1抗稀釋2000倍，
07/10 21:43, 10F
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07/10 21:46, , 11F
proform的背景不在那麼深，可是cleaved 卻沒壓出來。
07/10 21:46, 11F
推
07/12 12:40, , 12F
substract快速被消耗導致沒訊號
07/12 12:40, 12F
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07/14 19:11, , 13F
pro- 跟 actived form 是同一支抗體嗎 如果是不同支抗體
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07/14 19:11, , 14F
可能要調整一下抗體的 titer 如果是同支 通常 act-form 量少
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07/14 19:12, , 15F
比較難壓出來 有圖可以給大家看會比較清楚是壓沒有還是反白
07/14 19:12, 15F
推
07/14 21:02, , 16F
白是反白還是空的? 如果是空就是active form不多
07/14 21:02, 16F
推
07/14 21:05, , 17F
反而是要壓久點
07/14 21:05, 17F
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07/25 14:34, , 19F
19&set=a.265618446885587.60812.100003123028856&type=3
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07/25 14:35, , 20F
&theater 很抱歉，因為不知如何縮網址，抗體是一樣的!
07/25 14:35, 20F
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