[求救] 建立EGFR overexpression stable clone
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那麼我就開始了 事情是這樣的 我最近想利用口腔癌細胞株 OECM-1
將其利用transfection(lipofectamine)的方式 送入一個EGFR-pcDNA3.1的質體
送入後用G418(500ug/ml)挑單一colony 養大後之後用G418 keep著
篩了幾代後 發現細胞篩出來的細胞株 有total-EGFR protein表現比較多但上升不明顯
但是downstream signal 卻是很強(p-Akt,p-Erk) 都是western看到的結果
此外細胞型態也有改變 長的很像之前單純用parental OECM-1 treat EGF 的樣子
感覺有一點EMT 細胞變得有點皺皺老老的 型態很像是好事 但問題來了...
想請問板上的人有無做EGFR過度表達clone的經驗
為什麼我的total-EGFR都沒有變很強 但是下游訊號卻實有上升
我目前是將他keep在10%FBS RPMI media
接下來想試試看若是keep在 low serum 條件下有沒有辦法讓total-EGFR看起來多一點
想請問強者的經驗 或是各路英雄的指點 讓小弟實驗能繼續下去
謝謝大家
發問時請注意，若是要問實驗相關的問題，請將實驗的步驟、所用的條件大致列出
以方便板友幫您追蹤問題
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