[求救] FPLC的吸光值

看板Biotech作者時間13年前 (2012/06/19 22:15), 編輯推噓2(204)
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事前將海底生物中的蛋白質取出 先用FPLC做分離 有試過一些注射量,不會嚴重改變圖形的前提下 注射比較高的蛋白進去 後來老闆竟然說為什麼OD280 nm怎麼高到2200 mAU 左右 合理的範圍最高在1700 mAU左右才是,最理想是1500 mAU 然後說要稀釋重跑一張圖比較好 他又沒有要定量,而且各Fraction也不純也談不上定量 再說每種蛋白定量的線性範圍可以一視同仁嗎 他是用分光光度計的標準看待FPLC經由column後測量UV的值...... 不知道大家看法如何 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 111.240.95.211

06/19 23:09, , 1F
過column後測UV280nm,和分光光度計標準你覺得有何不同??
06/19 23:09, 1F
好像沒不同,原理是一樣,但兩者的數值是否因不同機型,不知道是否能轉換 是對老闆堅持數值不可以高於他講的,感到有點疑惑 分光光度計是知道1.5-2.0 AU算是定量用的最高值了, 接LC的UV detector也是嗎? ※ 編輯: higaaoi 來自: 111.240.95.211 (06/19 23:44)

06/20 01:50, , 2F
數值過高或過低會降低偵測的準確性 但是其實不會差很多
06/20 01:50, 2F

06/20 01:52, , 3F
從以前看過的書來講 理想值附近的準確率是99.9%
06/20 01:52, 3F

06/20 01:53, , 4F
超過理想值好幾倍準確率只剩99.5%
06/20 01:53, 4F

06/20 01:54, , 5F
以這些蛋白質實驗來講 其實差沒多少 所以不用擔心老師講的
06/20 01:54, 5F

06/20 19:57, , 6F
感覺沒差耶@@
06/20 19:57, 6F
文章代碼(AID): #1Fu8c3Rt (Biotech)