[求救] double restriction enzymes的處理

看板Biotech作者 (你笨笨所以我裝傻)時間13年前 (2012/06/15 16:17), 編輯推噓0(0推 0噓 1→)
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我用的是NEB的酵素 1. NsiI 37°C 有活性 2. BstBI 65°C 有活性 兩個酵素一起反應的話，NEB網站有說: Digest in NEBuffer EcoRI at 37°C with NsiI, then add BstBI and raise temperature to 65°C. This buffer is not supplied with either enzyme. 所以我buffer選用NEBuffer EcoRI 我實驗步驟也依照他說的，先加NsiI下去反應37°C，然後再加BstBI放到65°C下反應 結果跑膠之後，DNA都卡在well上面... 於是我分開做實驗 1.單純只加NsiI下去反應37°C ----> 有切成功! 2.單純只加BstBI放到65°C下反應 ----> 有切成功，可是效率不好~ 3.換buffer NO.2,3 or 4 先加NsiI下去反應37°C，然後再加BstBI放到65°C下反應 -----> 一樣DNA都卡在well上面... 有人有遇過這樣的問題嗎? 我真的卡住了~>"< -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 115.80.10.77
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06/15 20:56, , 1F
完成1.後跑膠確定有切動再加入BstBI放到65oC作用看看
06/15 20:56, 1F
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