[求救] ligation只會出現正接
大家好,
我目前的constrcut是要將兩個plasmid用Hind III 各切一刀
其中一個切完後做CIP處理，再接上另一個
A plasmid帶抗Amp基因, B plasmid帶抗Spe基因
所以只要能在LB+Amp+Spe的plate上長出來就基本上是我要的東西了
但基於後續轉殖後想利用plasmid rescue做插入點檢測
所以想選反接的construct, 但目前我做起來全是正接...
正接是會兩個Ubiquitin promoter 方向都一樣 ( → gene → gene) →:promoter
反接則是兩個promoer為背對反向 ( gene ←→ gene )
因為之前我做過一樣的construct 但兩個promoter各別為 35S 和ubiquitin promoter
這就很順利篩選出正反接都有的construct
但這次換成兩個Ubiquitin就不知道為何全是正接
是在猜該不會反接會使菌產生毒蛋白讓菌死掉, 剩正接的菌會活著...
不知道各位有沒有類似經驗的?
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