[求救] 蛋白質加SB煮後還有辦法定量嗎?

看板Biotech作者 (ラルクは信仰)時間13年前 (2012/05/31 08:49), 編輯推噓3(3推 0噓 7→)
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昨天匆忙之下 把定量的蛋白質sample打翻了 OTZ 但其他的已經加sample buffer煮了 還有辦法定量嗎? (我們是用BCA法) 還是只能跑WB後用nternal control去比對校正? (面壁思過中) -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.112.24.245
推
05/31 09:48, , 1F
除非你想要重新沈澱把 SDS, Dye, 還原劑拿掉再定量
05/31 09:48, 1F
推
05/31 10:57, , 2F
加了SB的sample我們是用10%TCA沉澱 再以少量0.1N NaOH回溶
05/31 10:57, 2F
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05/31 10:58, , 3F
之後加水稀釋後即可以bradford定量
05/31 10:58, 3F
請問這樣處理後的sample可以用BCA法定量嗎? 還是只能用bradford??
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05/31 17:50, , 4F
可以把protein點在filter上，再用coomassie blue染，與BSA
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05/31 17:51, , 5F
standard比對，即可得濃度。
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※ 編輯: raiyu 來自: 203.77.69.73 (06/01 21:14)
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06/02 00:06, , 6F
Thermp 有賣一套BCA (Reducing Agent Compatible)
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06/02 00:07, , 7F
可以在加了sample buffer之後測濃度
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06/02 00:07, , 8F
是Thermo > <
06/02 00:07, 8F
推
06/02 10:40, , 9F
datasheet都會寫耐detergnets的濃度,如果蛋白質濃度高可以稀釋
06/02 10:40, 9F
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06/02 12:55, , 10F
謝謝各位高人~ 我研究看看
06/02 12:55, 10F
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