[求救] PCNA stain 冷凍切片失敗

看板Biotech作者 (駒霹摩根)時間13年前 (2012/05/19 23:12), 編輯推噓0(0推 0噓 4→)
留言4則, 3人參與, 最新討論串1/1
嗨，各位版友好 小弟用冷凍切片來染PCNA，希望定量細胞複製的狀況。 所用的樣本是斑馬魚的冷凍切片。 但是一直染不太出來，很多雜訊，而且訊號都不是在細胞核 @@ 步驟大概是室溫4%PFA固定30min => Wash => 0.5% T-100 30min Wash x3 => 一抗1:100 四度ON Wash x3 => 二抗Dylight 488 1:200 一小時 Wash => DAPI 不知道有沒有人能有什麼建議? 萬分感謝 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.114.235.72
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05/20 00:20, , 1F
螢光顯微觀察收光時間多久? 有沒有同時做negative control?
05/20 00:20, 1F
※ 編輯: GPMorgan 來自: 140.114.235.72 (05/21 23:31)
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05/21 23:32, , 2F
2抗only是沒訊號的~ 目前也還在找其他可能原因
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05/22 21:13, , 3F
問個沒寫清楚的地方:你0.5% T-100是泡在PBS裡沒錯嘛?
05/22 21:13, 3F
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05/22 22:30, , 4F
恩~ 是在PBS裡，我懷疑是要做antigen retrieval
05/22 22:30, 4F
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