[求救] MCF-7 transfection 一直失敗

看板Biotech作者 (a213a21)時間13年前 (2012/05/04 18:01), 編輯推噓2(202)
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小妹最近開始做MCF-7 transfection 的實驗 因為要先抓條件 所以將一個帶有GFP的plasmid DNA transfect 到 MCF-7 裡 使用6-well 4ul plasmid(0.5ug/ul) + 6ul lipofectamine 2000 最後的總體積是 2 ml (皆用serum free 的 DMEM/F12 ) 6小時後觀察 結果transfection的效率很差 在顯微鏡下幾乎沒有看到綠色螢光 在google上找到的protocol 也是效率很差 想請問板上的高手們 有人做過MCF-7的 transfection 嗎?? 是我的plasmid:lipo 的比例抓錯嗎?還是有甚麼需要改進的地方? 實驗一直卡在這無法繼續做下去真的很焦躁阿!! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 163.13.115.17

05/04 18:25, , 1F
六個小時太短了....
05/04 18:25, 1F

05/04 19:1, , 2F
應該六小時換medium隔天再觀察吧
05/04 19:1, 2F
請問是換成complete medium 嗎? ※ 編輯: a213a21 來自: 163.13.115.17 (05/04 19:37)

05/04 19:45, , 3F
05/04 19:45, 3F

05/04 21:59, , 4F
post-transfect 24~48h 是轉錄作用的最高峰
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