[求救] 關於transfection前細胞處理問題
最近在做transfection的實驗，要將miRNA送入細胞
我用的產品是QIAGEN的Hiperfect transfection reagent
http://ppt.cc/-h_l
按照protocol的前處理，細胞計數完種入6-well plate，(我的細胞是HCT116，貼附型
大腸癌細胞，之前養一陣子的經驗，很耐，非常會長，平時都養在6mm dish)
隔天(18~24hr，我是22小時)transfection前2小時，換入新的DMEM，但是問題就
一直出現在這一步，我換了DMEM後，觀察一下了細胞，恩，沒事，於是我就去配置
transfection的試劑，30min後回去看，細胞漂了....我重複做了4,5次都一樣，
我都是很小心的慢慢吸掉與加入DMEM，但發現漂的地方通常是加入DMEM的地方，
我已經用10s加1 ml的速度慢慢沿著壁加進去了說QQ
之前養的經驗並不會這麼容易就漂，但如果多放幾天細胞就會貼很緊，但我怕放
太多天對要transfection的細胞DATA有所影響。
1.請問為什麼之前用6mm dish養時貼很緊，現在用6-well就貼不緊?(6-well plate
換過兩個廠牌都一樣)
2.如果多放幾天再transfection對DATA是否會有可信度的影響?
這問題困擾我很久了，6月要趕畢業這實驗一直做不起來我快抓狂了...QQ
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