[求救] 蛋白質誘導

看板Biotech作者 (將將)時間13年前 (2012/05/03 15:11), 編輯推噓2(2推 0噓 0→)
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最近將前人的凍菌進行IPTG誘導,但我誘導3次結果都不一樣 第一次結果:1mM IPTG誘導,5hr,37度 誘導成功,目標位子有很明顯的band 第二次結果:1mM IPTG誘導,16hr,37度 control比誘導的表現高 第三次結果:1mM IPTG誘導,5hr,37度 control比誘導的表現高 1mM IPTG誘導,16hr,37度 誘導成功,目標位子有很明顯的band PS.3次凍管皆相同 另外我也有拿不同sample進行1mM IPTG誘導,5hr/16hr,37度 結果 control比誘導的表現高 另外.將一己定序確認無誤之plasmid送至BL21 competent cell (實驗室自行製備) transformation後挑數個colony進行1mM IPTG誘導,5hr,37度 但跑膠結果發現,control竟然比誘導的表現高 請問是不是competent cell的問題??? 或者蛋白表現過高,反而抑制了生長?? -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 163.25.90.114
推
05/03 22:47, , 1F
重新transform看看~
05/03 22:47, 1F
推
05/08 23:26, , 2F
跑膠前的蛋白質定量無誤?每個land的濃度是否一致
05/08 23:26, 2F
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