[方法] 分析型超高速離心

看板Biotech作者 (memorize)時間13年前 (2012/04/23 16:03), 編輯推噓1(103)
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最近樣品送去做分析型超高速離心測試 得到的結果有點不甚清楚 想詢問板上的板友是否有相關經驗 我的樣品是protein和人造的lipid vesicle同時上機 但是我的樣品看起來其實還是澄清 但不是非常透明有一點白色 上機的分析結果是蛋白質有非常廣的分布(200mega K左右) 結果也許是imply我的東西會跟lipid有interaction 我的推測是lipid本身不具有UV吸收因此看到的訊號應該的確來自於protein 但是我有個很大的問題 一般測UV吸收應該是要完全澄清透明(一般指的是加入了GdmHCL去做denature 在此沒有) 如果有這麼大的分子量 那麼光的dispersion應該非常嚴重 超高速離心的UV分析是如何 避免這樣的情況呢? 就我所知 分析型超高速離心似乎是利用超高速離心然後輔助UVdetector去做 但是詳細 原理不甚瞭解 而且因為我的sample已經是protein + lipiosome 肯定不會是完全的澄清透明(即使肉眼 不可見) 搜尋了網路上的訊息 實在是看不到直接性的資訊 希望有經驗的板友可以告訴我一下 順便再問一個問題 一般的UV detect是加入GdmHCL去做denature然後用吸光係數去定濃度 原則上除了280 nm以外 其他波長的吸收通常不太管他 其中320 nm通常可以用來鑑定是否 有氣泡或者是不溶物 那麼如果我故意不加入GdmHCL 結果320 nm有吸收是代表甚麼呢? 打了很多 麻煩板友的幫忙了! 大感謝!!! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.114.44.48

04/25 18:40, , 1F
實驗前應該先確認只有單一種物質對280有吸光。
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如果不行請換波長,不然就再跑兩個cell
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把蛋白質跟liposome分開跑,再把圖疊在一起。
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有時候非常廣的分布也可能代表數種不同type在快速交換
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