[求救] CHIP sonication 急

看板Biotech作者 (Jim)時間12年前 (2012/04/15 18:09), 編輯推噓0(0推 0噓 10→)
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目前在做chromatin IP 今天收完細胞後加入formadehyde完再加入glycine 之後用PBS wash細胞 接著加入lysis buffer完 用SONICATOR 3000; Misonix進行sonication 條件是:on 10sec off:30 sec pulses:10 12W 跑完膠後感覺切的不是很好 但要等到明天才能跟老師討論 所以不知道可不可以把它放在-80度C冰箱儲存O/N 因為抗體貴所以不敢先直接加抗體放O/N 現在擔心的是放-80是否會使protein crosslink產生變化 進而影響我要做的後續分析 感謝~非常急 謝謝高手回答 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 203.71.94.31
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04/15 18:38, , 1F
不必放-80吧 4度就可以了吧 有加protease inhibitor?
04/15 18:38, 1F
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04/15 18:39, , 2F
-80 crosslink不會有事不過怕你的DNA會受傷
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我有加~
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DNA不能承受-80嗎?
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04/15 18:49, , 5F
LYSIS buffer中有加入PMSF&Na3PO4&leupeptin
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04/15 19:12, , 6F
freeze/thaw會斷 不過反正你ip都要搖o/n了表示
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stability不會太慘才對
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04/15 19:14, , 8F
我做的是rip 震完分裝進-80 不過你如果沒有要長期儲存
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04/15 19:14, , 9F
應該沒差吧(菸)
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04/15 19:15, , 10F
我剛剛把它放在-20了~應該可以吧= =
04/15 19:15, 10F
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