[求救]無法用Western Blot跑出有活性的Caspase-3
由於TNF-α是一個引起apoptosis的factor，
因此我們認為將細胞用TNF-α處理後會增加凋亡蛋白如Caspase-3的表現量。
並使pro-form的Caspase-3自我裂解成activated-form
我使用的細胞是G6PD正常和缺乏的嗜中性球（直接從正常人和病人抽血得到），
然後再將正常和缺乏的細胞以TNF-α分別處理3，4，6小時
（以上的步驟都是學姐處理好的，下面的才是我做的）
接下來就是以PBS wash，加入lysis buffer萃取出蛋白，再用Braford assay測蛋白濃度
最後將細胞，二次水和Western loading buffer混合配成sample，
每個sample都含有25μg的蛋白。
之後就是進行Western的步驟：蛋白質電泳，Transfer等等
然後我的一抗是anti-Caspase-3
它在分子量36的地方會出現pro-form，在17和19會出現activated-form
而二抗是新配的Mouse
－－－－－以上是大致的實驗方法，如果版友有需要我可以再打得更詳細－－－－－
可是最後的結果是，pro-form沒有問題，
但activated-form，學姊在17和19都有跑出來，但我的卻沒有，或是有但表現很淡
而我和學姊都用相同的一抗和二抗
請問造成我activated-form Caspase-3無法跑出來的原因可能是什麼呢？
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※ 編輯: keroromoa 來自: 163.25.118.137 (04/11 20:18)
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