[求救] HIS蛋白在beads上下不來
想請問各位大大
我的蛋白最近都在Ni beads上 無法下來
我的wash buf 是用 50mM NaH2Po4 300mM NaCl 10mM imidazole
elution buf 50mMNaH2Po4 300mM NaCl 250mM imidazole
蛋白是由pet28b系統在BL21中產生的
之前都沒有問題 但最近蛋白大都在beads上沒有辦法elute下來
imidazole濃度從250mM~500mM都試過
減少beads binding的時間 從之前的4度C o/n 室溫30分鐘
也還是很多蛋白在beads上
想請問我還可以用什麼方法得到elute的蛋白
因為我是需要看protein interaction 所以太破壞結合反應的方法可能不行
謝謝
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推
04/09 17:41, , 1F
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