[求救] pET28已轉殖基因系統更換至pET22系統

看板Biotech作者 (呆呆)時間13年前 (2012/04/05 16:03), 編輯推噓2(2推 0噓 3→)
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我先敘述問題原因 之前有先用pET28 vector成功轉殖上我的目標基因 因為後續做時發現我的目標基因，為膜蛋白,必須要有特殊的信號序列 因此要把目標基因改接在pET22 vector上。 當初pET28在做時His tag是放在前端並且我的目標基因前面有一大段 不是該基因的序列,這樣我能將pET28用酵素把我目標基因切下來,放入pET22上嗎? 後續蛋白表現時我的目標基因前端的序列會影響到我蛋白表現嗎? 或者還有其他更好的辦法呢? -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.130.176.215
推
04/05 18:59, , 1F
singal peptide是真核細胞的東西 對E.coli而言沒有特殊意義
04/05 18:59, 1F
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04/05 18:59, , 2F
打錯 signal
04/05 18:59, 2F
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04/05 19:00, , 3F
還有 膜蛋白建議去掉transmembrane region否則容易變不可溶
04/05 19:00, 3F
推
04/07 13:24, , 4F
原核細胞也是用的到signal peptide
04/07 13:24, 4F
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04/07 13:25, , 5F
如果你要表現在periplasm的話就需要
04/07 13:25, 5F
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