[求救] 關於semi-dry 小分子transfer
發問時請注意，若是要問實驗相關的問題，請將實驗的步驟、所用的條件大致列出
以方便板友幫您追蹤問題
----請將上列注意事項以 ctrl + k 刪除後開始編輯文章----
想請教各位大大
以前western我只用過濕轉的方式
不過現在我要用的是semi -dry
第一次用semi-dry時不是很熟悉 我要看的蛋白質大小約17kDa
那時候使用15v 30min 後來transfer完看到效果不好 ( 就是大分子的marker沒有過去
但是小分子約10KDa附近都有過去) 所以我又繼續給他tran了30min 所以這次的條件為
15v 60min 後來時間一到還是有一些大的
marker沒有過去 我想應該是氣泡的關係造成這樣的結果 不過因為我要看的蛋白大小ma
rker友過去(約15KDa ,10kDa )
所以我就繼續往下面的步驟了(blocking...1AB)而這次結果雖然有壓出band 不過
不是我預期的結果 所以我又重新製備sample
後來這次tranfer我就follow第一次作的條件 15v 60min 這次也有避免有氣泡
後來transfer大分子過去了 但是我小分子15kDa 10kDa的marker卻沒有在membrane上
想請問各位大大 是因為小分子跳海了嗎(是否transfer太久)? 我是不是應該把
時間調短15v 30min 或15v 15min 哪一個比較適合呢? 謝謝各位大大
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