[求救] 關於RT-PCR mRNA的QC與濃度問題

看板Biotech作者 (蒜頭)時間14年前 (2012/03/21 19:43), 編輯推噓0(0推 0噓 6→)
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如題 小弟目前在進行animal tissue(cell culture)的RT-PCR 當時低密度的種到6 well 的plate中 第七天收以RLT 1ml/well去收細胞 再進行RT-PCR(promega) 可是遇到兩個問題 1.最後測的RNA的濃度只有10 ng/ul，不知道是細胞一開始都沒收下來，還是RNA 降解得太快?這樣去上PCR，能轉的出來嗎? 2.260/230 = 0.2 260/280 = 2 QC很差，是有機物汙染太嚴重了嗎?如果是要如何解決? 謝謝!!! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 114.24.23.219 ※ 編輯: garlic774 來自: 114.24.23.219 (03/21 19:55)
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03/21 21:18, , 1F
10 ug/ul很濃的說,該不會是10 ng/ul吧?
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※ 編輯: garlic774 來自: 114.24.23.219 (03/21 21:37)
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是ng沒錯，謝謝W大
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qc的值在濃度太低的時候就沒什麼參考價值了
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應該把前面culture還有抽的protocol reagent講一下吧
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今天和學長討論過 發現有三個問題 1.在用RLT溶解細胞時，沒用刮杓 2.因為是一個well 1ml的RLT 輪流用在每個well，每次RLT都會殘留在上一個well 3.在晰出RNA時應該用應降低RNAse free water(20ul -> 15ul) 不曉得還有甚麼可以改進的地方呢? ※ 編輯: garlic774 來自: 140.112.131.184 (03/22 13:59)
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03/24 00:35, , 5F
我有看過完全smear的RNA 260/280有1.9以上唷
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03/24 00:35, , 6F
你說的 QC 是 Bioanalyzer 嗎？
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