[求救] 養大腸桿菌的問題

看板Biotech作者 (心動夢幻)時間14年前 (2012/03/10 10:17), 編輯推噓16(16推 0噓 17→)
留言33則, 14人參與, 最新討論串1/1
各位板友好： 這次是小弟第一次養細菌，不過實驗失敗了T ^ T 實驗是養大腸桿菌，從-80度冰箱取100 uL的大腸桿菌溶在5 mL LB裡面。 之後放到恆溫培養箱裡面，37度、200 rpm培養8小時，結果溶液超清澈Orz 想請教一下，因為實驗室沒有-80度冰箱，因此是寄放在其它實驗室。 做實驗前會將細菌取出，放到實驗室-20度的冰箱保存。 開始實驗時則會轉到一般冰箱上方的冷凍庫預備。 不過因為一些因素擺了一天左右的時間，不知道這樣是否會造成細菌死亡？！ 仔細想了整個實驗過程，覺得應該是溫度的因素造成細菌死亡，溶液才會超清澈。 不然就是從-80度冰箱取100 uL的大腸桿菌的時候，因為沒有做抽吸的動作混合溶液。 造成其實我只抽到100 uL的甘油，不知道這有沒有機會發生？！ 本來今天要再做一次實驗來驗證一些推測，不過對方實驗室沒開門。 拿不到細菌做實驗，只好先來這邊問有經驗的板友，希望可以提供一些意見。 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 1.169.175.227
推
03/10 12:11, , 1F
抗生素確定一下有沒有加錯? 可以養12-16小時!
03/10 12:11, 1F
→
03/10 12:13, , 2F
要養菌時直接從-80度挖點菌拿就好 不用等菌退冰!
03/10 12:13, 2F
感謝C大，的確有人建議我直接挖，不用這樣緩慢升溫。
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03/10 15:59, , 3F
凍菌的時候有沒有加glycerol?
03/10 15:59, 3F
回覆P大，這點應該是沒有問題才對。
推
03/10 16:46, , 4F
100ulin 5ml八小時應該會有了 會不會沒凍好? 甘油和菌有無混
03/10 16:46, 4F
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03/10 16:47, , 5F
勻
03/10 16:47, 5F
Q大您好，這點我就沒辦法確定，個人就是擔心沒有混勻XDDD
推
03/10 17:42, , 6F
原本菌液就有問題了吧 E.coli隨便沾一下就會長了
03/10 17:42, 6F
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03/10 19:38, , 7F
就算不勻也不可能只抽到甘油連一隻細菌都沒沾到呀
03/10 19:38, 7F
關於這點，得到的溶液確實非常清澈Orz 感謝上面的板友幫忙，這兩天會再重複做一次實驗。 實驗室還有其它管可以使用，小弟會拿其它管及有問題的那管一起測試。 主要是想釐清哪個環節有問題，避免重蹈覆轍。 其實還是比較擔心溫度的問題，下次會直接從-80度取出使用^^ ※ 編輯: euphonium15 來自: 1.169.175.227 (03/10 21:41)
推
03/10 21:46, , 8F
做抽吸的動作死更大吧...
03/10 21:46, 8F
請教R大，為什麼會死更大呢？！
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03/10 21:48, , 9F
出了放到冰上一下下 沒人像你那樣退冰的... 這麼搞剛
03/10 21:48, 9F
另外就是放到冰上的意思應該是做之前，放到冰塊裡面對嗎？
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03/10 21:49, , 10F
最有可能是抗生素或那管菌/整盒都壞掉了
03/10 21:49, 10F
※ 編輯: euphonium15 來自: 1.169.175.227 (03/10 22:08)
推
03/10 23:44, , 11F
抗生素+1 一摳賴沒有那麼容易死
03/10 23:44, 11F
推
03/11 16:06, , 12F
抗生素+1 e.coli只要沾到一顆就會長
03/11 16:06, 12F
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03/11 16:07, , 13F
退冰過程根本沒差 別說-20度 4度C放一個禮拜都不會怎樣
03/11 16:07, 13F
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03/11 16:13, , 14F
說抗生素問題,除非拿錯了,否則就算只是壞了為何長不起來
03/11 16:13, 14F
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03/11 16:27, , 15F
就是說拿錯了啊...原po的菌是從別的實驗室拿來的
03/11 16:27, 15F
雖然說是放在別的實驗室，不過有自己實驗室專屬的盒子應該是不會拿錯^^
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03/11 16:28, , 16F
搞不好別的實驗室建構的construct用的抗生素不一樣
03/11 16:28, 16F
推
03/11 17:48, , 17F
就不要加抗生素養養看嘛 又花不了多少時間= ="
03/11 17:48, 17F
實驗室有配好的LB溶液，取5 mL之後加入100 uL的E.coli甘油溶液後，理論上就會生長。 關於上面幾位板友提到的抗生素，小弟真的不太清楚，這點自己會先去查查文獻。 ※ 編輯: euphonium15 來自: 1.169.175.227 (03/11 18:21)
推
03/11 19:05, , 18F
是誰教你這樣養細菌的...
03/11 19:05, 18F
推
03/11 19:33, , 19F
.......天啊~怎麼這樣養菌的?!
03/11 19:33, 19F
推
03/11 19:36, , 20F
有一本書叫做molecular cloning,請好好地查閱一下= ="
03/11 19:36, 20F
兩位板友好，自己實驗室本來就不是專長於細菌這一塊領域。 不過還是有部分學生從事這方面研究，本是想說他們都養的起來應該是沒甚麼問題才對。 ※ 編輯: euphonium15 來自: 1.169.175.227 (03/11 20:53)
推
03/12 00:31, , 21F
確定好實驗室配的LB有沒有加抗生素,若沒有的話,你的無菌操
03/12 00:31, 21F
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03/12 00:31, , 22F
作真的是挺優秀的@@a
03/12 00:31, 22F
推
03/12 00:34, , 23F
如一樓大大所說,你可以養久一點,我們實驗室都養到16-18hr
03/12 00:34, 23F
推
03/12 05:52, , 24F
實驗室有配好的LB 然後不曉得要加抗生素
03/12 05:52, 24F
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03/12 05:52, , 25F
帶你做實驗的人應該拖出來罵一下
03/12 05:52, 25F
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03/12 05:53, , 26F
幾乎每個實驗室都會養e.coli，跟專長是不是在細菌沒關...
03/12 05:53, 26F
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03/12 05:55, , 27F
我想你們實驗室已經配好的LB應該是加了抗生素
03/12 05:55, 27F
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03/12 05:55, , 28F
但是你要養的菌對這種抗生素沒有抗性 所以長不起來
03/12 05:55, 28F
推
03/12 12:20, , 29F
不用畫盤?
03/12 12:20, 29F
推
03/12 15:00, , 30F
找人教比較快，最好是看哪個實驗室願意讓你在旁邊看怎麼做
03/12 15:00, 30F
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03/12 15:01, , 31F
真的不是三言兩語就可以說得清楚的
03/12 15:01, 31F
推
03/12 20:58, , 32F
原PO感覺很菜 大家不要太兇啦XD
03/12 20:58, 32F
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03/12 20:59, , 33F
找個有經驗的人問一下 在這邊很難搞懂你的問題出在哪
03/12 20:59, 33F
感謝樓上幾位，小弟真的很菜>"< ※ 編輯: euphonium15 來自: 140.114.45.131 (03/19 21:33)
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