[求救] 得不到insert ....
老師要我做construct
insert的部分 我先跑PCR 然後拿2ul跑膠check 得到很亮的band
之後PCR產物(38ul)全下去跑膠(load了三個well)
切了120mg的膠去溶 加500ul的GEX buffer
最後用60ul的60度C水去elute
之後跑膠check 照膠結果亮度變得很普通
接著取42.5ul的elution 用XhoI 2.5ul去切 切完之後全下跑電泳
照膠結果 雖然滿淡的 不過用GeneSnap去看還滿清楚的 切膠機下則是勉強看的到
切膠時 膠有260mg 所以我分兩管elute 各加500ul GEX buffer 最後各用35ul水去elute
但是 我取5ul去check時 卻根本沒有東西 >.<
去測DNA濃度 竟然還是負的Orz
我切膠的過程 都是照protocol上走 不過 我發現elute時即使水下在膜中央
水滴還是會歪一邊= = 然後就沒有全都包覆到膜
就會懷疑那半邊的DNA有沒有下來
不知道大家有沒有經驗 能夠幫忙敝人改正錯誤 得到insert呢?
另外想問一下有沒有人的實驗室是用一種不用gel extraction
而是直接用吸起來的電泳槽? 不知道那個要多少錢呢?
謝謝
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