[求救] 中研院shRNA transfect至細胞中
大家好，最近我在中研院訂了兩株基因的shRNA菌液 (為pLKO.1 vector)
自己用TB養大量抽取以後，老師教我先試試看直接transient transfect至293細胞中
目的是想確認這兩組shRNA是否真的在細胞中有作用
奇怪的是完全都沒有knock down
在這之前我都確認了
1. shRNA已定序過，的確是辨認我想要的基因
2. 大量DNA用phenol/chloroform沉澱過，有跑膠且測定OD260/280為1.6-1.7
3. 抗體已確認過可用，我曾經外加表現此基因至293細胞，major band有增加的現象
4. 我確認自己trasfection的技術沒問題，還請其他人幫忙做過，也無 K.D.的反應
我在中研院訂這兩組shRNA時，它還有feedback表示兩組的K.D.效率都有70%
不知道版上有沒有人曾經拿過中研院的shRNA轉染到細胞有K.D.成功的，想請教心得
感謝~
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