[討論] Western Blot蛋白質跑膠

看板Biotech作者 (Din)時間12年前 (2012/02/27 23:50), 編輯推噓9(9推 0噓 10→)
留言19則, 11人參與, 最新討論串1/1
請問各位WB蛋白質跑膠有沒有什麼技巧可以讓band跑出來比較平整,美一點嗎? 或是有沒有什麼其他可以注意的地方,小撇步?? 感謝大家!!! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 114.46.116.98
推
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要不要po一下你的condition好讓大家trouble shooting?!
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先用低電壓讓它通過上膠後再調高至所需電壓
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推
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推樓上 小心點可以全程用低電壓跑 還有膠凝好的問題
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推
02/28 10:18, , 4F
所以高低電壓的分界點和band當時在哪裡會影響到漂不漂亮囉？
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推
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製膠盡量混勻 Transfer時如果放膠的時候膠被擠壓到
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你的band出來的形狀也會歪掉
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感覺我load完要跑的時候都糊掉了,而且跑的時候形狀並
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不是很平整,會有中間凹陷的問題~~不知道是load的問題
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還是saple沒弄好???
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常常是sample體積太多,10ul以下比較好
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推
02/28 21:03, , 11F
loading sample體積要一樣多，不然容易歪掉
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02/28 22:28, , 12F
不過蛋白質定量之後為了取同樣濃度,體積不一定會一樣耶
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是要用5x dye把它補到大家體積都一樣嗎??
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推
02/28 22:59, , 14F
用1X dye補到同體積~跑慢一點也會比較漂亮
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02/29 13:09, , 15F
要用5X dye和ddwater稀釋到濃度相同，體積才會一樣
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推
03/01 23:56, , 16F
我反而想知道如何讓band解析度更好
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推
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低電壓跑 我習慣60V過上膠 再調到80 or 100跑到完
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但是大分子的我用低電壓跑反而都看不到=口="
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推
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1. 新鮮的buffer 2.低電壓 3.冷氣房 4.睡個覺起來再說
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