[求救] transfection efficiency (Huh-7)
不管怎做都只接近50%
但希望能更高一點 能達到70%
我的方法:
3cm dish 5*10^5/3 ml growth medium
1. opti(92 ul) + lipofectamin 2000 (8 ul), RT 5 mins => A eppendrof
2. add opti (97 ul) + EGFP (3 ul) into A eppendrof, RT 20 mins => B eppendrof
(total volume = 200 ul)
3. remove medium and wash for dish
4. add 800 ul into B eppendrof => C eppendrof (dilute toxicity)
(total volume = 1 ml )
5. add 2 ml growth medium and C eppendrof into 3cm dish
4. incubate 24 hrs
因為Huh-7很難transfect 所以才用24小時(48小時我也試過)
而不是opti transfect 6hrs後把opti含有lipo倒掉再換growth medium
(我曾經試過 但因為換growth medium 而細胞會繼續長)
但是理論上GFP應該算蠻簡單吃進去
請問我哪裡步驟需要更改會比較好
但我去算時大約都才接近50%
還是要只用opti transfect 6小時後 不要倒掉再加growth medium會比較好?
感謝
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有妳們在的風景,永遠是我心底最最美好的詩句
相逢如絮紛飛,飄揚卻也沉落的夢妳好正願意嫁給我嗎
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※ 編輯: GanLinBa 來自: 115.43.213.75 (01/11 02:30)
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