[求救] 各種Fusion protein的好處

看板Biotech作者hoop0227 (阿啾)時間14年前 (2011/12/14 14:31)推噓3(3推 0噓 3→)

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不好意思, 最近我實驗上會用到fusion protein來當作tag, 學長就問我了幾種tag的好處和用途, 1.Thioredoxin (Trx) : thioredoxin 完全是可溶性，不形成包涵體，此蛋白質的分子量不大，只有11.675 K Da ，而且其N-端及C-端都能由分子的表面接觸到。另外thioredoxin 還有兩個特性：(i)對熱的穩定性，因此fusion protein 在80℃處理10 分鐘仍然維持可溶狀態，此特性可以被用來去除大部分的細胞蛋白質；(ii)此蛋白質位於內細胞膜(inner membrane)上，因此可以利用osmotic shock技術加以回收。 2.Maltose Binding Protein (MBP) : MBP通常接在目標蛋白質的N-端，與maltose具有很好的親和性，利用maltose粒子管柱進行純化，使用Maltose溶液將管柱中的目標蛋白沖堤下來，之後再利用特定蛋白酶將MBP從目標蛋白上剪切下來，即可得到純化的目標蛋白質。 3.Glutathione S Transferase (GST) : Glutathione S-transferase, GST，與Glutathione具有很好的親和力，利用Glutathione 粒子管柱進行純化，Glutathione溶液可以將管柱中的目標蛋白沖堤下來，之後再利用蛋白酶(Thrombin)GST從目標蛋白上剪切下來，即可得到純化的目標蛋白質。 4.His Tag : His-tag是最常被使用的蛋白質純化工具，目標蛋白質C-端帶有六個Histidine ，Histidine具有imidazole ring的結構，可與帶二價正電的陽離子相螯和，故可利用帶有鎳離子（Ni2+）的親和力管柱純化，使用較高濃度的Imidazole solution可以將目標蛋白沖堤出來。可是還有Calmodulin Binding peptide (CBP),和NusA這兩種我都找不到, 雖然看到很多人用,可是卻沒有說為何這兩種的用途的差別, 不知道有沒有人可以跟我說呢!?!? 感謝! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.109.40.22

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leoblack

12/14 14:57, , 1^F

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Marriott

12/14 16:40, , 2^F

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icome

12/14 19:39, , 3^F

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