請問大家ligation時ligase使用的量

看板Biotech作者lier1986 (紫)時間12年前 (2011/12/09 20:41)推噓5(5推 0噓 3→)

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前情題要我在11月底有發了文想詢問cloning的相關事宜那我目前的進展是 1.所有想要clone的gene，經PCR後，已經接到pGM-T上了。 (pGM-T是跟基隆米克斯買的，聽說是陸製的次等貨= ="；非invitrogen的pGEM-T) 2. competent cell的問題已經解決。我自己做的competent cell轉型效率大概是10^5~10^6左右現在是打算把pGM-T裡面的insert給切下，然後接到pET20b上使用的RE為NdeI & HindIII 但是做了兩三次一直接不上去 RE的切割應該是沒問題的我回頭去看其他人ligation的protocol 好像使用ligase的量都不太一樣所以想問問各位如果你們家用的ligase是NEB的大概ligase的量都加多少呢? (我看了一下NEB ligase的產品說明... 我好像每次做都加入400U的ligase 不知道這樣會不會太多= =" 我看TA cloning kit做ligation時一次也才加3U的ligase...) -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.122.198.1

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dodomilk

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