[求救] 想表現EGFP

看板Biotech作者 (Syu)時間14年前 (2011/12/08 01:08), 編輯推噓6(6推 0噓 9→)
留言15則, 7人參與, 最新討論串1/1
最近剛做完一連串DNA subcloning的實驗 做的是基本款實驗 miniprep 限制酶切 + 電泳 (BamHI+XbaI) ligation + transformation 限制酶切 + PCR 用的plasmid是pcDNA3-eGFP 因為老師一時心血來潮 想要把GFP表現出來給我們看 表現用的plasmid是BL21(DE3) clone進去之後拿去養卻沒看到什麼結果 請問板上各位前輩 這可能是哪裡出問題？ 因為我還是個初心者 我只能想到一開始實驗用的gene真的是eGFP嗎 我也只能想到用定序的方法確認... 麻煩各位前輩提供一些看法~謝謝~ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 163.25.118.166
推
12/08 01:48, , 1F
定序啊
12/08 01:48, 1F
推
12/08 03:05, , 2F
bl21是菌株 不是plasmid...
12/08 03:05, 2F
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12/08 03:08, , 3F
所以vector是甚麼 promoter是甚麼
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12/08 03:08, , 4F
start/stop codon? frameshift?
12/08 03:08, 4F
推
12/08 09:05, , 5F
eukaryotic promoter，pcDNA3的話
12/08 09:05, 5F
推
12/08 10:42, , 6F
送進細胞看看吧?
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12/08 14:47, , 7F
vector是pcDNA3
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12/08 14:47, , 8F
promoter是用T7p
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12/08 14:50, , 9F
不清楚老師為什麼用T7p…切口前面剛好有一段T7的序列
12/08 14:50, 9F
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12/09 00:54, , 10F
你有加inducer嗎
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12/09 01:23, , 11F
老實說這個實驗是老師做了之後告訴我們結果
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12/09 01:24, , 12F
原本是希望我們想想看，不過原po才疏學淺.....-.-
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12/09 01:24, , 13F
應該是沒有加inducer，老師在講解的時候沒有特別提到
12/09 01:24, 13F
推
12/09 13:57, , 14F
沒有加當然不會大量表現
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推
12/09 15:33, , 15F
ㄜ...................
12/09 15:33, 15F
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